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目前已确定的病毒性肝炎病原体有5种,即甲型肝炎病毒(hepatitisAvirus,HAV)、乙型肝炎病毒(hepatitisBvirus,HBV)、丙型肝炎病毒(hepatitisCvirus,HCV)、丁型肝炎病毒(hepatitisDvlrus,HDV)、戊型肝炎病毒(hepatitisEvirus,HEV)、除HBV为双链DAN病毒外,其余均为单链RNA病毒。
抗HAV抗体测定(anti-hepatitisAvirus,anti-HAV)
HAV属于小RNA病毒科,为嗜肝RNA病毒,在体内主要在肝细胞内进行复制,通过粪一口途径传播,多数学者认为HAV不存在慢性携带状态。
ELISA法:抗HAV-IgM阴性;抗HAV-IgG阴性或阳性。
血清中抗HAV-IgM在发病1~2w内出现,3m后滴度下降,6m后则不易测出,抗HAV-IgM阳性已被公认为是早期诊断甲型肝炎的指标。抗HAV-IgG出现较抗HAV-IgM稍晚,可长期或终身存在,抗HAV-IgC阳性表示既往感染,但体内已无HAV,是一种保护性抗体,可用于检测机体或注射甲肝疫苗后是否具有对HAV的免疫力以及流行病学调查。
1.ELISA法影响因素较多,标本要防止溶血,因红细胞中含有过氧化物酶,红细胞裂解后造成标本溶血,易造成假阳性。
2.要注意hook效应,即标本含量过高时,由于抗原一抗体比例不合适,易出现假阴性结果。
3.抗心律失常药物,如普鲁卡因胺、肼苯达嗪,异烟肼,苯妥英钠,保泰松等药物可引起假阳性。
4.洗涤次数要适当,防止洗涤不彻底致假阳性或洗涤过多致假阴性,要严格按照试剂盒说明书要求进行操作。
乙型肝炎病毒(HBV)病原学指标测定
HBV属于有包膜的嗜肝DNA病毒科,血循环中与HBV有关的颗粒从形态上至少可分为三类:1小球形颗粒并非完整的HBV,而是病毒的外壳(或称包膜),由脂蛋白构成,是乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的主要成分,HBsAg由于在肝细胞内参与装配Dane颗粒后过剩,游离于外周血,本身无传染性。2管形颗粒实际为一串聚合的小球形颗粒,直径与小球形颗粒相近,具有HBsAg特性。
3大球形颗粒即完整的HBv,又称为Dane颗粒,由外壳和核壳组成。核壳内古有环状双股DNA、DNA多聚酶、核心抗原(HBcAg)、e抗原(HBeAg)等,是病毒复制的主体。
HBV主要通过血液途径传播,也可通过母婴等途径传播。一般机体感染HBV后产生3种抗原抗体系统:HBsAg和乙型肝炎表面抗体(抗HBs)、HBeAg和乙型肝炎e抗体(抗-HBe)、HBcAg和乙型肝炎核心抗体(抗-HBc)。
乙型肝炎病毒表面抗原(hepatitisBvirussurfaceantlgen,HBsAg)
HBsAg存在于HBV的外壳,是一种糖蛋白,为大、小球形颗粒和管状颗粒所共有。HBsAg的抗原性较复杂,采用血清学方法分类古有5种不同的抗原表位,分别为a、d、y、w、r'其中a属于特异性共同抗原决定簇。目前已知有10种亚型,最常见的主要有adr、adw、ayw、ayr等4种,各亚型分布有明显的地区性,我国长江以北以adr为主,长江以南以adr和adw为主,新疆、西藏、内蒙古等少数民族地区主要为ayw,因此HBsAg亚型对乙型肝炎流行病学调查和预防有一定意义。
ELISA法:阴性。
参见抗HAV抗体测定中ELISA法。
HBsAg-般在感染HBV后1~2m内出现于血清中,短时在2w内即能够检出,可维持数周、数月、数年以至长期携带。HBsAg虽然本身不具有传染性,但由于其常与HBV同时存在,因此HB-sAg阳性时常被用作传染性的标志之一。HBsAg阳性见于乙肝潜伏期和急性期、慢迁肝、慢活肝、肝硬化、肝癌、慢性HBsAg携带者等。血清HBsAg仅为HBV感染的标志,不反映有无复制、复制程度、传染性强弱及预后等情况。
乙型肝炎病毒表面抗体/抗-HBs(hepatitisBvirussurfaceantibody.HBsAb)
抗-HBs是机体针对HBsAg产生的一种保护性抗体,表明对HBV具有一定免疫力。一般情况下,抗-HBs在HBsAg消失后出现,多为IgG,少数患者中有IgM,是疾病恢复的开始,可持续多年,其滴度与特异性保护作用相关。
ELISA、法:阴性。
参见抗HAV抗体测定中EUSA法。
抗HBs阳性见于既往感染HBV现已恢复,且对HBV有一定免疫力,接种乙肝疫苗后,仅出现单项抗-HBs阳性;被动性获得抗-HBS抗体,如注射特异性Ig或输血等。
抗-HBs和HBsAg可同时出现在HBV感染恢复期,此时HBsAg尚未消失,而抗HBs已产生;或是s区基因发生变异,野株抗-HBs不能将其中和清除;或是抗-HBs阳性者感染了免疫逃逸株。HBsAg、抗-HBs和抗-HBc同时存在多见于暴发性肝炎患者。
乙型肝炎病毒e抗原(hepatitisBviruseantigen.HBeAg)HBeAg位于HBV的核心部分,是一种可溶性抗原,由感染的肝细胞分泌入血,在血中可游离存在。
ELISA法:阴性。
参见抗HAV抗体测定中ELISA法。
1.急性HBV感染时HBeAg出现稍晚于HBsAg,消失先于HBsAg,长期存在提示病情趋于慢性化。在慢性HBV感染时HBeAg是主要的免疫耐受因子,大部分情况下HBeAg存在表示患者处于高感染低应答状态。
2.HBeAg阳性常见于HBsAg阳性者,患者血清中含有较多的HBV颗粒,由于HBeAg与HBVDNA密切相关,因此是HBV复制活跃且有较强传染性的标志;HBeAg持续阳性的乙肝患者易转为慢肝,HBeAg和HBsAg同时阳性的孕妇可发生HBV母婴垂直传播。
乙型肝炎病毒e抗体,抗-HBe(hepatitisBviruseantibody,HBeAb)
抗-HBe是在HBeAg消失后,机体所产生的一种非保护性抗体,抗-HBe阳转表示病毒复制多处于静止状态,但并不代表病毒复制停止或无传染性,20%~50%患者仍可检测到HBVDNA。部分患者可能由于前C区基因变异,导致不能形成HBeAg所致,一般情况下抗-HBe和HBeAg不会同时存在。抗-HBe出现早于抗-HBs,检出抗-Hbe提示传染性明显降低或相对降低。
ELISA法:阴性。
参见抗HAV抗体测定中ELISA法。
1.抗-HBe出现的快慢与肝炎转归有关。在乙肝急性期出现抗-HBe,易发展为慢性乙肝;慢性活动肝炎出现抗-HBe可能进展为肝硬化;若HBsAg阳性伴有抗-HBe,且ALT升高,须注意原发性肝癌的可能性。
2.抗-HBe阳性常伴抗-HBc阳性,检出率在慢性乙肝、肝硬化、肝癌患者有逐渐递增的现象,提示多数患者HBV感染时间较长。
乙型肝炎病毒核心抗体,抗-HBc(hepatitisBviruscoreanti-body,HBcAb)
HBcAg是位于HBV的核心部分,主要存在于被感染肝细胞的细胞核内,游离HBcAg在血清中含量极少,检测比较繁琐,一般不作为常规测定。抗-HBc是针对HBcAg而产生的非保护性抗体,主要包括抗HBc-IgM、抗HBc-IgG、抗HBc-IgA等三型,目前临床常检测总抗-HBco
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